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脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染DNA的操作過(guò)程脂質(zhì)體2000適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前條件下zui方便的轉(zhuǎn)染方法之一。轉(zhuǎn)染率高，優(yōu)于磷酸鈣法，比它高5~100倍，能把DNA和RNA轉(zhuǎn)染到各種細(xì)胞。用脂質(zhì)體2000進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，首先需優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，應(yīng)找出該批LR對(duì)轉(zhuǎn)染某一特定細(xì)胞適合的用量、作用時(shí)間等，對(duì)每批LR都要做：先要固定一個(gè)DNA的量和DNA/LR混合物與細(xì)胞相互作用的時(shí)間，DNA可從1~5μg和孵育時(shí)間6小時(shí)開始，按這兩個(gè)參數(shù)繪出相應(yīng)LR需用量的曲線，再選用LR和DNA兩者*的劑量，確定出轉(zhuǎn)染... 查看詳情 2015-01-13
HyClone胎牛血清培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞的兩種方法 HyClone胎牛血清培養(yǎng)血管平滑肌細(xì)胞常用的方法有貼塊法(explant)和酶解離法(enzymedisperse)。下面一起來(lái)看下這兩種方法。1、貼塊法方法：動(dòng)物經(jīng)頸動(dòng)脈放血后，在無(wú)菌操作下迅速取出胸腹主動(dòng)脈段，置于含Hank's液的平皿中漂洗3次，將凝塊洗干凈后剝除外膜的纖維脂肪層，然后縱行切開血管，刮除內(nèi)膜即內(nèi)皮細(xì)胞迅速撕下中膜內(nèi)、中層，切成約1mm寬的小條，浸泡在含血清的Hank's液中，并將撕下小組織塊種植于培養(yǎng)瓶壁。置于37℃恒溫箱，2h左右，取出培養(yǎng)瓶加入20... 查看詳情 2015-01-06
纖維素酶的性質(zhì)及作用機(jī)理詳解纖維素酶分子的大小因來(lái)源不同而不盡相同，三大類酶分子量一般在23Kda～146Kda之間。多數(shù)真菌和少數(shù)細(xì)菌的纖維素酶都受糖基化，糖基與蛋白之間以共價(jià)鍵結(jié)合，或呈可解離的絡(luò)合狀態(tài)。糖基化作用在一定程度上保護(hù)酶免受蛋白酶的水解，而纖維素酶正是由于糖基化，使其所含碳水化合物的比率在不同酶之間發(fā)生差異，導(dǎo)致酶的多形式和分子量的差別。通過(guò)比較分析，人們發(fā)現(xiàn)許多不同纖維素酶間表現(xiàn)出一定的同源性，且纖維素酶分子普遍具有類似的結(jié)構(gòu)。由球狀的催化結(jié)構(gòu)域(CD)、連接橋和纖維素結(jié)合結(jié)構(gòu)域(CB... 查看詳情 2014-12-20
瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)之凝膠制作與點(diǎn)樣一、瓊脂糖凝膠制作1、瓊脂糖凝膠濃度配制凝膠的濃度據(jù)實(shí)驗(yàn)需要而變，一般在0．8％～2．0％之間，如果一次配制凝膠100ml，沒(méi)用完的凝膠可以再次融化，但隨著融化次數(shù)的增加，水分丟失也越多，凝膠濃度則會(huì)越來(lái)越高，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不穩(wěn)定，補(bǔ)水辦法：一是在容器上標(biāo)記煮膠前的刻度，煮膠后補(bǔ)充相應(yīng)的水分至原刻度；二是在煮膠前稱重，煮膠后補(bǔ)充水至原重量。粗略一點(diǎn)的方法是通過(guò)多次較恒定的煮膠條件得出一個(gè)經(jīng)驗(yàn)補(bǔ)水值。以保證凝膠濃度基本維持在原濃度。核酸染色劑溴化乙錠(ethidiumbromid... 查看詳情 2014-12-10
脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)材料及操作步驟一、脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)材料：1、Vero細(xì)胞2、轉(zhuǎn)染級(jí)質(zhì)粒3、DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液：無(wú)血清DMEM、10%血清DMEM4、脂質(zhì)體20005、6孔細(xì)胞培養(yǎng)板二、脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)操作步驟：（以6孔板為例予以說(shuō)明）1、細(xì)胞鋪板：轉(zhuǎn)染前一天進(jìn)行鋪板，第二天待細(xì)胞長(zhǎng)成單層即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染。（Vero細(xì)胞按一傳三的比例進(jìn)行傳代，一般10~12h即可。）2、溶液1：240ul無(wú)血清DMEM+10ullipofectamine2000perwell（總體積250ul）（溫育5mi... 查看詳情 2014-12-05

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