培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基：使用DMEM培養(yǎng)基，并添加10%的胎牛血清（FBS）和1%的青霉素/鏈霉素（P/S）。

培養(yǎng)條件：細(xì)胞需要在含有95%空氣和5%二氧化碳（CO?）的孵箱中，于37℃進(jìn)行培養(yǎng)。

傳代培養(yǎng)：266-6細(xì)胞易聚團(tuán)，每次傳代均要保證胰酶消化充分，用含血清培養(yǎng)基終止消化，收集細(xì)胞后離心，收集細(xì)胞沉淀。細(xì)胞沉淀先使用3mL巴氏管輕柔吹打混勻，充分制備成單細(xì)胞懸液，再進(jìn)行分瓶傳代。建議的傳代比例為1:2至1:3，每周進(jìn)行23次傳代。每次傳代，均使用新的培養(yǎng)容器，培養(yǎng)容器二次使用易導(dǎo)致細(xì)胞聚團(tuán)。

細(xì)胞復(fù)蘇：將含有細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入適量培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基后吹勻，然后將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜，第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

細(xì)胞凍存：先將細(xì)胞消化并收集，離心后棄上清，加入凍存液，重懸細(xì)胞，并分裝到凍存管，凍存密度0.81.5×10?細(xì)胞/mL。將凍存管放入程序降溫盒，并放到80℃冰箱，過(guò)夜后將凍存管轉(zhuǎn)移到液氮保存。

鑒定方法

形態(tài)學(xué)鑒定：在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，266-6細(xì)胞呈現(xiàn)上皮細(xì)胞樣的形態(tài)特性，多為多邊形或立方體形，貼壁生長(zhǎng)。

分子生物學(xué)鑒定：可通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞中特定基因的表達(dá)來(lái)鑒定，如檢測(cè)彈性蛋白酶I/新霉素轉(zhuǎn)基因的表達(dá)情況，因?yàn)?66-6細(xì)胞帶有該轉(zhuǎn)基因。還可以檢測(cè)多種消化酶mRNA的表達(dá)，266-6細(xì)胞保留部分分化的表型，會(huì)表達(dá)可檢測(cè)水平的多種消化酶mRNA。

功能學(xué)鑒定：利用266-6細(xì)胞對(duì)某些物質(zhì)有反應(yīng)的特性進(jìn)行鑒定，如該細(xì)胞對(duì)卡巴膽堿和縮膽囊素有反應(yīng)，但對(duì)P物質(zhì)、促胰液素或血管活性腸肽（VIP）沒有反應(yīng)，可通過(guò)給予相應(yīng)刺激物，觀察細(xì)胞的反應(yīng)來(lái)輔助鑒定。