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脂質體2000轉染法的原理說明

更新時間:2018-02-07  |  點擊率:2472
   脂質體2000是陽離子脂質體N-[1-2,3-Dioleyoxy, Propyl]-n, n,n-Trimethylammonium Chloride(DOTMA)和Dioleoyl photidye-thanolamine(DOPE)的混合物[1:1(w/w)]。它適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中,是目前條件下zui方便的轉染方法之一。轉染率高,優(yōu)于磷酸鈣法,比它高5~100倍,能把DNA和RNA轉染到各種細胞。

  用LR進行轉染時,首先需優(yōu)化轉染條件,應找出該批LR對轉染某一特定細胞適合的用量、作用時間等,對每批LR都要做:*,先要固定一個DNA的量和DNA/LR混合物與細胞相互作用的時間,DNA可從1~5μg和孵育時間6小時開始,按這兩個參數(shù)繪出相應LR需用量的曲線,再選用LR和DNA兩者*的劑量,確定出轉染時間(2~24小時)。因LR對細胞有一定的毒性,轉染時間以不超過24小時為宜。

  細胞種類:COS-7、BHK、NIH3T3、Hela和Jurkat等任何一種細胞均可作為受體細胞。

  脂質體2000轉染方法原理

  脂質體2000轉染方法原理:脂質體2000作為體內和體外輸送載體的工具,已經研究的十分廣泛,用合成的陽離子脂類包裹DNA,同樣可以通過融合而進人細胞。使用脂質體將DNA帶人不同類型的真核細胞,與其它方法相比,有較高的效率和較好的重復性。

  中性脂質體是利用脂質膜包裹DNA,借助脂質膜將DNA導入細胞膜內。帶正電的陽離子脂質體,DNA并沒有預先包埋在脂質體中,而是帶負電 的DNA自動結合到帶正電的脂質體上,形成DNA-陽離子脂質體復合物,從而吸附到帶負電的細胞膜表面,經過內吞被導入細胞。

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